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小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的方法步驟介紹

更新時(shí)間:2021-07-24點(diǎn)擊次數(shù):2021
  小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞是一種除造血干細(xì)胞以外的、具有多向分化潛能的干細(xì)胞,可以向骨、軟骨、肌組織、皮膚、脂肪、神經(jīng)等多種組織分化,因此可以作為組織工程中的種子細(xì)胞,在適當(dāng)?shù)臈l件下,骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞可以分化為三個(gè)胚層來(lái)源的組織細(xì)胞而進(jìn)行細(xì)胞移植的治療,在體外培養(yǎng)擴(kuò)增后也可種植在生物材料上,回植入機(jī)體修復(fù)組織損傷。
  充質(zhì)干細(xì)胞在治療組織器官退行性疾病,遺傳缺陷性疾病和基因治療方面也展現(xiàn)了美好的前景,本產(chǎn)品具有良好的增殖和分化潛能,可分化為成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、軟骨細(xì)胞等,采用干冰保存運(yùn)輸。收到細(xì)胞時(shí),若干冰已經(jīng)*融化,請(qǐng)立即將細(xì)胞復(fù)蘇培養(yǎng);若尚留有干冰,請(qǐng)立即將細(xì)胞放入液氮中保存待用,請(qǐng)按條件貯存細(xì)胞,切不可將細(xì)胞置于高溫環(huán)境。
  方法步驟:
  1、沿著脊髓切開,從身體的軀干解剖后肢,小心不要損傷股骨;
  2、進(jìn)一步解剖后肢,通過(guò)切開膝關(guān)節(jié)來(lái)切開每個(gè)后肢;從脛骨和股骨中去除肌肉和結(jié)締組織;將骨干刮干凈;
  3、超凈臺(tái)操作,切斷骨髓腔末端下方的脛骨和股骨的末端;將裝有完整培養(yǎng)基的10 ml注射器上的27號(hào)針頭插入通過(guò)移除生長(zhǎng)板暴露的海綿狀骨中,用1ml*培養(yǎng)基將骨髓塞從骨頭切開的末端沖洗出來(lái),收集在冰上的10ml管中。
  4、小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞通過(guò)70mm過(guò)濾網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞懸液,以去除任何骨針或肌肉和細(xì)胞團(tuán)塊; 通過(guò)臺(tái)盼藍(lán)排除法測(cè)定細(xì)胞的產(chǎn)量和活力,并在血細(xì)胞計(jì)數(shù)器上計(jì)數(shù)。
  5、在95mm培養(yǎng)皿中培養(yǎng)BM細(xì)胞,在1ml*培養(yǎng)基中,密度為25×106個(gè)/mL細(xì)胞(基于步驟4中獲得的細(xì)胞計(jì)數(shù));3h后更換新的*培養(yǎng)基。
  6、再培養(yǎng)8小時(shí)后,用1.5ml新鮮的*培養(yǎng)基替換培養(yǎng)基;此后,每8小時(shí)重復(fù)該步驟,直至72小時(shí)的初始培養(yǎng)。
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